Download BADANIE GENETYCZNE W KIERUNKU CHOROBY WILSONA...
Description
BADANIE GENETYCZNE W KIERUNKU CHOROBY WILSONA (BADANIA DNA W KIERUNKU OBECNOŚCI MUTACJI W GENIE ATP7B) ___________________________________________ W Pracowni Neuroimmunologii II Kliniki Neurologii prowadzone są obecnie przesiewowe badania genetyczne, mające na celu wykrycie mutacji najczęściej występujących w populacji polskiej chorych na chorobę Wilsona (ChW) (są to mutacje wykryte na więcej niż 1% wszystkich alleli w analizie przeprowadzonej na 143 chorych z ChW). Są to następujące mutacje: Mutacja Mutacja (białko)
Ekson 14 15 20
(DNA) c.3207C>A c.3402delC c.4051C>T
p.H1069Q p.A1135fs p.Q1351X
Wykonanie badań pozwala na potwierdzenie rozpoznania choroby Wilsona na poziomie genetycznym u około 80% chorych z populacji polskiej (na podstawie wyników badań opublikowanych w Clin Genet. 2005;68:524-32). W przypadku niewykrycia żadnej, bądź wykrycia tylko jednej mutacji w genie ATP7B, możliwe jest wykonanie analizy sekwencji genu ATP7B metodą sekwencjonowania. Materiał niezbędny do wykonania badania: ►
krew obwodowa pobrana „na EDTA”: 2 probówki, po ok. 3-5 ml krwi w każdej
Temperatura/ czas przechowywania materiału przed wysyłką: ►
temperatura pokojowa: do 5 godzin
►
2-8oC / do 5 dni
►
-20oC/ do 5 miesięcy
►
Poniżej -70oC/ dłużej niż 5 miesięcy
Temperatura wysyłki: ►
Materiał schłodzony: 2-8oC
►
Materiał mrożony w temperaturze -20oC: temperatura poniżej -20oC
►
Materiał mrożony w temperaturze poniżej -70oC: w pojemniku z suchym lodem
Etykieta probówki:
►
Nazwisko i imię pacjenta
►
Data urodzenia
►
Data pobrania materiału na badania
Czas oczekiwania na wynik badania – zależny od przebiegu badania: ► w przypadku wykrycia mutacji c.3207C>A (p.H1069Q) [mutacja najczęściej występująca w polskiej populacji, obecna na ok. 72% allel;, około 50% chorych z chorobą Wilsona w Polsce posiada tę mutację w obu allelach genu ATP7B] w obu allelach genu ATP7B: około tygodnia ► w przypadku konieczności wykonania badania w kierunku obecności pozostałych mutacji w genie ATP7B, najczęściej występujących w polskiej populacji: około 3 tygodni Koszt badań: zależny od przebiegu badania: ► w przypadku wykrycia mutacji c.3207C>A (p.H1069Q) w obu allelach genu ATP7B – 170,00zł ► w przypadku konieczności wykonania badania w kierunku obecności 3 najczęściej występujących mutacji w genie ATP7B Mutacja Mutacja (białko)
Ekson 14 15 20
(DNA) c.3207C>A c.3402delC c.4051C>T
p.H1069Q p.A1135fs p.Q1351X
całkowity koszt badania w takiej sytuacji wynosi 350,00zł) ► w przypadku konieczności wykonania badania całego genu ATP7B (21 egzonów) – całkowity koszt badania wynosi 970,00 zł
Metoda badania: sekwencjonowanie metodą Sangera. W przypadku wykrycia mutacji stosuje się polimerazowa reakcja łańcuchowa połączona z analizą długości fragmentów restrykcyjnych (PCR-RFLP; polymerase chain reaction, restriction fragments length polymorphism) w celu potwierdzenia. Interpretacja wyników badania: Odbywa się na podstawie oceny pojedynczych nukleotydów w badanym egzonie w porównaniu z matrycą kontrolną w metodzie sekwencjonowanie.
W metodzie PCR-RLFP - na podstawie oceny obrazu uzyskanego na żelu agarozowym barwionym bromkiem etydyny, w którym przeprowadza się rozdział elektroforetyczny analizowanych fragmentów DNA. Normy: nie dotyczy (badanie nie jest badaniem ilościowym, lecz jakościowym, ocenianym w systemie plus/minus). System kontroli jakości: Stosowana jest wewnątrzlaboratoryjna kontrola jakości, która polega na równoległym wykonywaniu rozdziału elektroforetycznego fragmentów DNA osób badanych oraz fragmentów DNA wzorcowych, odpowiednich do rodzaju analizowanej mutacji (wzorce ustalono w oparciu o wyniki badań DNA metodą sekwencjonowania). Ocena wyników badań dokonywana jest przez dwukrotną ocenę obrazu na żelu agarozowym dokonywaną niezależnie w różnym czasie przez dwie osoby.
